DOI10.1016/j.jconrel.2020.07.047
與傳統的口服或注射疫苗相比，經皮免疫（TCI）具有避免肝臟首過效應、依從性好和使用方便的優點。但是，皮膚角質層（SC）是限制抗原分子進入表皮以激活樹突狀細胞（DCs）的主要障礙。本研究通過層層自組裝法制備了透明質酸（HA）和半乳糖基化殼聚糖（GC）修飾的醇質體（Eth-HA-GC）。Eth-HA-GC具有良好的穩定性，并且可以在體外被骨髓來源的樹突狀細胞（BMDCs）有效吞噬。卵清蛋白（OVA）負載Eth-HA-GC（OVA@Eth-HA-GC）可以促進BMDCs的CD80、CD86（DCs成熟相關標記分子）、TNF-α、IL-2和IL-6表達。隨后，通過綠色靜電紡絲法制備了一種新型的負載OVA@Eth-HA-GC的絲素蛋白（OVA@Eth-HA-GC/SF）納米纖維墊。OVA@Eth-HA-GC/SF墊在體外表現出良好的透皮性能。用OVA@Eth-HA-GC/SF墊經皮給藥可誘導血清中的抗OVA特異性IgG，并增加體內脾細胞的IFN-γ、IL-2和IL-6表達。此外，在小鼠模型中，使用OVA@Eth-HA-GC/SF墊明顯抑制了EG7腫瘤的生長。這些結果表明，OVA@Eth-HA-GC/SF墊可以通過透皮給藥有效刺激對OVA的免疫反應。總之，抗原@Eth-HA-GC/SF墊是一種很有前途的TCI系統。
圖1.使用Franz擴散池進行體外皮膚滲透測定的方案
圖2.Eths的紅外光譜（a：HA；b：GC；c：Eth；d：Eth-HA；e：Eth-HA-GC）
圖3.Eth、Eth-HA和Eth-HA-GC的TEM圖像（a，b，c），ζ電位（d）和直徑（e）（a：Eth；b：Eth-HA；c：Eth-HA-GC）
圖4.DCs吞噬DiI標記Eth的共聚焦激光掃描顯微鏡圖像
圖5.與不同載體共培養24小時后，BMDCs中FITC熒光信號的流式細胞術直方圖（A）和百分比（B）（a：游離FITC-OVA；b：FITC-OVA@Eth；c：FITC-OVA@Eth-HA；d：FITC-OVA@Eth-HA-GC）
圖6.與OVA負載Eths共培養24小時后，BMDCs分泌的CD11c、CD80、CD86、TNF-α、IL-2和IL-6的水平。
圖7.不同SF貼片的SEM照片（左列），直徑分布（中間列）和熒光顯微照片（右列）（a：SF；b：OVA/SF；c：OVA@Eth/SF；d；OVA@Eth-HA/SF；e：OVA@Eth-HA-GC/SF；f：FITC-OVA/SF；g：FITC-OVA@Eth/SF；h：FITC-OVA@Eth-HA/SF；i：FITC-OVA@Eth-HA-GC/SF；a1、b1、c1、d1和e1分別指a、b、c、d和e的直徑）
圖8.不同支架上的L929細胞的增殖和形態（A：細胞增殖；B：細胞的SEM圖像；C：用若丹明標記的鬼筆環肽和DAPI染色的細胞，鬼筆環肽與F-肌動蛋白結合，使微絲染成紅色，DAPI使核染成藍色；a：蓋玻片；b：SF；c：OVA@Eth/SF；d：OVA@Eth/SF；e：OVA@Eth-HA/SF；f：OVA@Eth-HA-GC/SF）
圖9.墊在體外的透皮性能（A：累積的透皮釋放曲線；B：皮內藥物保留；C：用不同墊治療后的皮膚橫斷面；D：用不同墊治療后的皮膚縱斷面；以及a：FITC-OVA/SF；b：FITC-OVA@Eth/SF；c：FITC-OVA@Eth-HA/SF；d：FITC-OVA@Eth-HA-GC/SF；1：熒光照片；2：顯微照片；3：熒光照片和顯微照片的合并）
圖10.接受經皮免疫的小鼠血清OVA特異性IgG和脾細胞源性細胞因子（IFN-γ、IL-2和IL-6）的水平。
圖11.負載OVA的墊經皮免疫接種后第28天（B）的腫瘤生長曲線（A）和腫瘤照片（a：對照組；b：OVA/SF組；c：OVA@Eth/SF組；d：OVA@Eth-HA/SF組；e：OVA@Eth-HA-GC/SF組；*：與對照組相比有顯著差異；＃：與OVA/SF組相比有顯著差異。
