Mater. Sci. Eng. C：AIP的無損定量方法評價骨傳導納米材料

DOI:10.1016/j.msec.2020.110931

堿性磷酸酶（ALP）是成骨細胞活性的重要生物標志物。目前，ALP活性已被用于研究骨礦化機制和骨活性生物材料等。通常通過破壞性方法對正在評估骨傳導生物材料的生長細胞或細胞裂解液進行ALP定量分析。這項工作探討了一種無損比色法測定培養上清液對成骨細胞來源外泌體的ALP活性。以復合有ZnO的PCL骨傳導電紡支架為參考材料，對該方法的有效性進行了評估。結果表明，通過無損檢測成骨細胞衍生外泌體的ALP活性，可以隨時間監測由骨傳導支架誘導的成骨細胞系礦化。因此，這種非破壞性方法被認為是定量生物材料骨傳導性甚至評估干細胞成骨細胞反應的可靠替代技術。

圖1.hFOB培養物的ALP活性。根據原位（a）、細胞裂解物（b）和培養上清液（c）技術測定ALP活性。 *表示每種技術在日期之間存在顯著性差異（p＜0.05，單向方差分析）。

圖2.離心產物的ALP活性。隨時間推移（a）和第14天，在不同的離心分離階段，未離心、3000 g和100,000 g（b）培養上清液的ALP活性。增加離心速度以在連續的幾輪中將較小的顆粒沉淀。不同階段在T150培養瓶上以25.000個細胞/ml接種的hFOB細胞的顯微照片（c）。放大條=100 μm。**統計顯著性相當于p≤0.05。

圖3.納米EV表征。在培養的第14天，NTA從hFOB上清液和中等+10%FBS濃縮液獲得的納米EV的大小和濃度。插圖顯示了中等+10%FBS的顆粒濃度的放大（a）和hFOB上清液濃縮物的納米EV的TEM顯微照片（b）。

圖4.原位ALP活性與培養上清液的關系。通過破壞性原位技術（a）和無損上清液技術（b）獲得的TCP、PCL墊和PCL+ZnO墊的ALP活性。如所觀察到的，上清液技術反映了與原位技術相同的hFOB響應，這證明了此處分析的無損方法的功效。**和*的統計顯著性分別相當于p≤0.005和p≤0.05。