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    J. Biomed. Mater. Res. Part B Appl. Biomater.:含CAGE的電紡蛋白支架的制備

    2021-01-12   易絲幫

    DOI: 10.1002/jbm.b.34788

    傷口愈合試圖維持傷口內的穩態,同時盡量減少外來病原體(如機會致病菌)感染組織的風險。由這些病原體形成的生物膜是引起慢性感染的常見原因,而這些慢性感染通常會減緩愈合過程。與常規傷口敷料相比,由與皮膚相關的電紡絲蛋白組成的皮膚傷口愈合裝置可加速愈合過程。在這項工作中,研究者采用靜電紡絲法將抗菌離子液體/深共晶溶劑膽堿和香葉酸(CAGE)摻入這些裝置中。通過1H核磁共振波譜驗證了CAGE與敷料的結合,并使用掃描電子顯微鏡評估了其對所得器件材料性能的影響。含CAGE的裝置顯示革蘭氏陽性和革蘭氏陰性病原體(分別為大腸桿菌和銅綠假單胞菌)外源應用溶液的濃度依賴性失活,但仍保持了其作為人真皮新生成纖維細胞增殖兼容平臺的能力。

     

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    圖1.制備支架的靜電紡過程示意圖。溶液通過帶正電荷的針頭從注射器中排出到帶負電荷的鋁收集器上,形成模擬人類細胞外基質的固體支架。


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    圖2.交聯支架在894x放大倍數下的掃描電子顯微鏡圖像:(a)對照支架(不含CAGE),(b)含5%CAGE的支架,(c)含10%CAGE的支架,(d)含20%CAGE的支架和(e)含40%CAGE的支架,然后干燥(1小時),使用碳帶將其安裝在鋁制短管上,并用金-鈀進行濺射鍍膜(20秒)。


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    圖3.純CAGE(藍色)和從電紡支架中提取的CAGE(紅色)的核磁共振譜。


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    圖4.外源應用(a)腸球菌或(b)銅綠假單胞菌與含有CAGE的支架孵育2小時后的存活率。兩個曲線圖均顯示了對照(未浸漬)(深藍色),含5%(橙色),10%(灰色),20%(黃色)或40%(淺藍色)(vol:vol)CAGE的支架的結果。(*p<0.05,**p<0.01)


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    圖5.PrestoBlue?測定結果。


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    圖6.CyQuant?分析結果。


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    圖7.PrestoBlue?值除以CyQuant?值的圖,代表每單位DNA的代謝活性。


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    圖8.hDFn細胞暴露于CAGE稀釋液24小時后:(a)0mM;對照,(b)0.22mM,(c)0.44mM,(d)0.89mM,(e)1.77mM,(f)3.55mM,(g)7.09mM,(h)14.19mM,(i)28.38mM。


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    圖9.遷移到支架上的hDFn細胞的光學顯微鏡圖像:(a)和(b)對照支架(無CAGE),(c),(d)和(e)含有40%CAGE的支架。


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    圖10.含40%CAGE的細胞化支架的掃描電子顯微鏡分析:(a)和(b)hDFn細胞(偽彩色并以藍色突出顯示)通過支架纖維遷移,(c)含有由hDFn細胞產生的新細胞外基質(ECM)的支架。對于存在細胞和ECM結構的細胞化支架與無細胞和ECM結構的非細胞化支架的比較,請參考圖2(e)。


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