DOI:10.1016/j.ijbiomac.2020.07.278
在這項工作中，研究者提出了一種實現α-淀粉酶和辣根過氧化物酶（HRP）雙重固定化的簡便技術，即通過簡單的混合步驟，將兩種不同的酶模型包封在兩種不同的聚合物電紡纖維中，并比較它們在單獨固定化形式和游離形式下的性能。使用傅里葉變換紅外光譜（FTIR）和場發射掃描電子顯微鏡（FESEM）對固定化進行了驗證。雙固定化HRP和α-淀粉酶的固定化效率分別為89％和85％。雙固定化HRP和α-淀粉酶在10個循環后的催化活性分別為79％和80.2％。儲存12周后，雙重固定化酶仍保留與單獨固定化酶相似的活性，接近于90％。相對于不同的酶活性測定方法，該固定方法似乎對兩種酶均未產生負抑制或反抑制作用。這種方法表明，兩種或多種類型的酶可以分別與不同的聚合物混合，并同時進行靜電紡絲。作者認為該方法有望大大促進和擴展多酶系統的應用，同時為酶介導級聯反應的深入研究奠定了堅實的基礎。
圖1.酶（HRP和α-淀粉酶）的雙重固定化過程。
圖2.含α-淀粉酶和HRP的電紡纖維的FESEM圖像。
圖3.PCL（PCL），聚碳酸酯基聚氨酯（Carb），PCL與聚碳酸酯基聚氨酯（PCL/Carb）以及封裝α-淀粉酶和辣根過氧化物酶的PCL與聚碳酸酯基聚氨酯（PCL/HRP+Carb/淀粉酶）的ATR-FT-IR光譜（A）和擴展區域的ATR-FT-IR（B，C）。
圖4.單獨和雙重固定化HRP（a），單獨和雙重固定化α-淀粉酶（b）的再利用。每個點代表三次實驗的平均值±SE。
圖5.pH的影響。
圖6.在4℃下的存儲穩定性。
圖7.（a）愈創木酚和（b）H2O2濃度下過氧化物酶活性以及（c）淀粉存在下α-淀粉酶活性的Lineweaver-Burk圖和底物飽和曲線。
