DOI:10.1016/j.bbrc.2020.06.006
MiRNA是指小的非編碼RNA，通常參與調節mRNA和干細胞分化。由于3D納米纖維支架與細胞外基質（ECM）相似，因此在干細胞分化中起著重要作用。本研究試圖介紹一種新方法，通過在2D和3D基質上遞送hsa-miR-9-1來引導結膜間充質干細胞（CJMSCs）分化為光感受器樣細胞。首先，用攜帶miR-9的慢病毒載體（pCDH+hsa-miR-9-1）轉導CJMSCs，然后通過熒光顯微鏡、流式細胞術和qPCR分析驗證細胞的轉導效率。采用靜電紡絲技術制備了絲素蛋白-聚乳酸（SF-PLLA）支架，并通過SEM、FTIR和MTT分析對支架的形態、化學性質和生物相容性進行了評估。然后，將miR-9-CJMSCs分別接種在TCPS和支架上。轉導14天和21天后，通過RT-qPCR和免疫組化染色評估光感受器基因和蛋白質的表達。與對照組（EV）-CJMSCs相比，在miR-9-CJMSCs中轉導了80％以上的CJMSCs，miR-9表達明顯更高。SEM和FTIR證實成功制備了SF/PLLA雜化結構。RT-qPCR和免疫組化染色分析表明，在miR-9轉導的CJMSCs中表達了特異性的光感受器基因和蛋白質。在TCPS和納米纖維支架上，Mir-9呈時間依賴性誘導CJMSCs分化為光感受器樣細胞。研究證明hsa-miR-9-1具有指導間充質干細胞分化為光感受器細胞并促進視網膜再生的潛能。
圖1.（A）在TCPS和支架上培養的CJMSCs中，14天和21天后miR-9過表達載體轉導效率的熒光圖像（40倍）。（B-C）：通過流式細胞儀和q-PCR分析驗證CJMSCs中的miR-9過表達。該比率是指與TCPS上的空載體（不含miR-9的CJMSCs）相比，miR-9的表達率。SNORD-47用于標準化。REST?軟件用于基因表達分析。星號表示顯著性差異（p≤0.05）。
圖2.SF-PLLA支架上附著細胞的SEM圖像：第14天EV-CMSCs（A），第21天EV-CJMSCs（B），第14天miR-9-CJMSCs（C）和第21天miR-9-CJMSCs（D）。
圖3.miR-9轉導CJMSCs的光感受器細胞基因表達譜。將細胞接種在支架和TCPS上14天和21天，并分析光感受器基因的表達。該比率是與TCPS上的EV-CJMSCs（不含miR-9的CJMSCs）相比，基因的表達率。REST?軟件用于基因表達分析。星號表示顯著性表達率，P≤0.05。
圖4.在培養基中，miR-9轉導的CJMSCs在TCPS和支架上第14天和21天的免疫染色。分析轉導細胞的恢復蛋白（A）和視紫紅質（B）表達。GFP細胞與4,6-二氨基-2-苯基吲哚共染色以觀察細胞核（藍色）。（要解釋該圖例中對顏色的引用，請參閱本文的網絡版本。）
